1、乙酰CoA进入三羧酸循环：乙酰CoA具有硫酯键，乙酰基有足够能量与草酰乙酸的羧基进行醛醇型缩合；

2、异柠檬酸形成：柠檬酸的叔醇基不易氧化，转变成异柠檬酸而使叔醇变成仲醇，就易于氧化，此反应由顺乌头酸酶催化；

3、第一次氧化脱羧：此反应是三羧酸循环中的限速步骤，ADP是异柠檬酸脱氢酶的激活剂，而NADH是此酶的抑制剂；

4、第二次氧化脱羧：阿尔法酮戊二酸脱氢酶复合体受ATP、GTP、NADH和琥珀酰CoA抑制；

5、底物磷酸化生成ATP：在琥珀酸硫激酶的作用下，琥珀酰CoA的硫酯键水解，释放的自由能用于合成gtp；

6、琥珀酸脱氢：琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸氧化成为延胡索酸；

7、延胡索酸的水化：延胡索酸酶仅对延胡索酸的反式双键起作用，而对顺丁烯二酸则无催化作用

8、草酰乙酸再生：在苹果酸脱氢酶作用下，苹果酸仲醇基脱氢氧化成羰基，生成草酰乙酸。