美洲草原野牛由于其体型关系，并受到同住野牛群的保护，除了人类外，它们很少有令其受威胁的敌人。美洲野牛的野生天敌主要是灰狼和有毒的响尾蛇。尤其是幼龄的美洲野牛，会受到狼群在冬季的攻击，而响尾蛇会咬伤牛的脚踝，这种伤害对于小牛有时是致命的。即使灰熊和狼群会攻击刚出生的或年幼的小牛，但也只是在严冬，因为那时候野牛无法消耗能量去保护那些离群的野牛。虽然狼群也能击败一头野牛，但一般都要有7只狼以上才能做到，不过狼很多时候都会败给野牛。