操作步骤如下：

1、用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现缺口，露出黏性末端；

2、再用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端；

3、将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处；

4、再使碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键；

5、再加入适量的DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。